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Spectroscopie optique
Ce plateau technique permet de regrouper en un seul lieu de nombreux appareils de spectroscopie optique pour la caractérisation biophysique d’échantillons biologiques. Destiné en priorité aux équipes du CBM, ce service est également ouvert à la communauté scientifique régionale, nationale et internationale, qu’il s’agisse de laboratoires publics (CNRS, Université,…) ou d’entreprises privées
Différentes modalités d’utilisation du plateau technique sont possibles :
- La prestation de service : ponctuellement, le personnel de la plateforme peut réaliser une analyse, par exemple pour un test de faisabilité.
- L’accès encadré : le personnel de la plateforme encadre et accompagne les utilisateurs.
- Le libre accès : les utilisateurs sont formés aux techniques et appareils pour pouvoir ensuite s’en servir en toute autonomie.
- La collaboration : implication plus importante du personnel de la plateforme, dans le développement de la technique d’analyse et l’exploitation des résultats.
Le service de spectroscopie optique compte cinq techniques majeures :
- La spectroscopie d’absorption UV-visible
- La spectrofluorimétrie
- Le dichroïsme circulaire
- Le lecteur plaques multilabels
- La résonance plasmonique de surface
Divers petits équipement (vortex, étuve pour le séchage des cuves de spectroscopie, bain-marie, …) sont également disponibles sur le plateau.
Spectroscopie d’absorption UV-visible
La spectrophotométrie est une méthode analytique quantitative qui consiste à mesurer l’absorbance (ou densité optique) d’une substance chimique en solution limpide, en utilisant une lumière sensiblement monochromatique. On peut ainsi, par exemple, déterminer la concentration d’une substance en mesurant l’absorption relative de la lumière par rapport à celle d’une substance de concentration connue. Cette méthode d’analyse est intéressante car elle permet de travailler sur de faibles quantités de substance, de manière non destructrice vis-à-vis de l’échantillon. Elle s’applique à un très grand nombre de dosages. On peut aussi l’utiliser pour déterminer la concentration précise d’un composé absorbant à partir de son coefficient d’extinction molaire, notamment pour les acides nucléiques et les protéines.
Appareils disponibles sur le plateau : Uvikon XL (Secomam) équipé avec bain-marie ; Uvikon 941+ (Kontron) équipé avec bain-marie et logiciel pour acquisition programmable de courbes de fusion.
En savoir plus sur la spectroscopie d’absorption UV-visible
 Uvikon XL |
 Uvikon 941+ |
Spectrofluorimétrie
La spectroscopie de fluorescence permet d’analyser, à l’équilibre ou en temps réel, les variations de l’environnement de sondes fluorescentes intrinsèques (notamment tryptophanes dans les protéines) ou extrinsèques (fluorophores synthétiques). Cette technologie peut permettre aussi bien l’étude de la stabilité conformationnelle de molécules, que la caractérisation d’interactions moléculaires ou encore la quantification d’activité enzymatique.
Appareil disponible sur le plateau : FluoroMax2 (Jobin-Yvon) équipé avec bain-marie
En savoir plus sur la spectrofluorimétrie
Dichroïsme circulaire
Le dichroïsme circulaire est une technique spectroscopique d’analyse couramment utilisée pour étudier la conformation des protéines et des acides nucléiques, mais aussi pour les polysaccharides ou pour les petites molécules. Elle est particulièrement adaptée à l’étude des changements structuraux induits par des variations du milieu (pH, température, détergents, co-solvants, tampons …). Parmi les avantages du dichroïsme circulaire vis-à-vis d’autres techniques, on peut citer que l’on travaille en solution diluée, avec de faibles quantités de produit (quelques dizaines de µg), sans limite de taille sur la molécule. Les mesures sont simples et rapides, permettant des mesures cinétiques à des temps très courts. De plus la mesure n’est pas destructrice et il est possible de récupérer l’échantillon après l’acquisition du spectre.
Appareil disponible sur le plateau : J810 (Jasco) équipé avec système Peltier, et stopped-flow.
En savoir plus sur le dichroïsme circulaire
Lecteur de plaques multilabels
Deux lecteurs de plaque sont dispcnibles sur la plateforme, l’un étant multilabels (Victor) et le second plus spécifiquement dédié à la bioluminescence (Mithras).
Le Victor est un lecteur de plaques incluant 5 technologies : Spectrocolorimétrie, Luminescence, Fluorescence, Fluorescence polarisée, Fluorescence en temps retardé.
Le Mithras est équipé pour la Fluorescence, l’Absorption et la Luminescence. Il dispose de deux injecteurs.
Dans les deux systèmes un jeu de filtres d’excitation et d’émission permet de choisir les longueurs d’ondes adaptées à de nombreux marqueurs.
Appareil disponible sur le plateau : VICTOR 3V (Perkin Elmer), Mithras (Berthold)
Résonance plasmonique de surface
La technologie BIAcore ("Bia" pour "biomolecular interaction analysis" et "core" pour "au cœur de") permet d’étudier des interactions moléculaires entre deux partenaires en temps réel. On observe en temps réel la cinétique de formation/dissociation de complexes entre des biomolécules (ADN/protéine, protéine/protéine) ou entre une biomolécule et un ligand de petite taille (inhibiteur, activateur, effecteur….). On peut ainsi en déduire les constantes d’affinité, la spécificité et les mécanismes d’interactions impliqués, ou la concentration en protéine active dans un mélange. Il est également possible d’effectuer la recherche de partenaires inconnus associés à une protéine d’intérêt (couplage Biacore/MS-ligand fishing).
Appareil disponible sur le plateau : Biacore 3000 (GE Healthcare) équipé avec bain-marie.
En savoir plus sur la résonance plasmonique de surface
VILLETTE Sandrine Ingénieur de recherche CNRS
Responsable techniqueTel : 02 38 25 55 38
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