Centre de biophysique moléculaire - UPR 4301

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Accueil du site > Thèmes de recherche > Nouvelles cibles thérapeutique et vectorologie : Approches moléculaire et cellulaire > Transfert de gènes par des vecteurs synthétiques

Transfert de gènes par des vecteurs synthétiques

DESCRIPTIF DU TRAVAIL DE RECHERCHE

Notre recherche se concentre autour de la vectorisation d’acides nucléiques (ADN et ARN) par des vecteurs chimiques originaux et s’intéresse au développement d’une nouvelle méthode physique utilisant les ultrasons. Nos travaux se situent à l’interface de la chimie et de la biologie avec la synthèse de vecteurs, la formulation des acides nucléiques, l’étude des mécanismes de pénétration cellulaire et de trafic intracellulaire ainsi que l’expression de gènes médicaments. Notre étude concerne les domaines du cancer, de la mucoviscidose et des dégénérescences tissulaires. Les recherches s’organisent autour de quatre thématiques.

Transfert de gènes : vecteurs chimiques et sonoporation

Nous synthétisons des polymères et des lipides histidylés originaux et développons une méthode fondée sur les ultrasons et des microbulles de gaz. Dans le but de trouver une efficacité maximale, nous menons des études d’internalisation, de trafic intracellulaire et de transcytose par cytométrie en flux et imagerie cellulaire par microscopie spectrale confocale.

Vaccination anti-cancer par transfert d’ARNm d’antigènes tumoraux

Un des challenges pour induire une réponse immune anti-tumorale spécifique, consiste à identifier des molécules se comportant comme des véhicules vaccinaux afin de cibler sélectivement in vivo les antigènes tumoraux vers les cellules dendritiques et les activer pour induire une rupture de tolérance. Nous développons une approche vaccinale par transfert d’ARNm d’un antigène tumoral pour induire une réponse immune anti-cancéreuse spécifique. Le modèle utilisé est le mélanome murin B16F10.

Thérapie génique appliquée aux pathologies liées aux tendons

La dégénérescence tissulaire est une manifestation clinique observée dans les désordres tendineux provoqués par des surmenages physiques ou consécutifs à une maladie rare. La perte ou l’absence de capacité réparatrice et des processus microtraumatiques répétitifs rendent les cellules des tendons incapables de réparer les fibres endommagées. Notre approche consiste à transférer des gènes de facteurs de croissance et de molécules impliquées dans la fibrillogénèse et l’assemblage du collagène pour accélérer la régénération des tissus lésés. Le tendon d’Achille de rat et les tendons de souris transgéniques Fmod/lum double KO du syndrome Ehlers-Danlos sont nos modèles.

Réparation des mésappariements de l’ADN platiné et apoptose

La thérapie génique pourrait permettre de réactiver et/ou d’inhiber certaines voies de signalisation cellulaires modulant la sensibilité de plusieurs agents cytotoxiques anticancéreux conventionnels (cis platine) afin de potentialiser la chimiothérapie sans altérer, à long terme, le fonctionnement des cellules normales.

ILLUSTRATIONS

Confocal laser scanning microscopy (CLSM) of HeLa cells stabilized by EYFP-laminB (yellow) and ECFP-tubulin (blue) and transfected with rho-pDNA polyplexes (red).

HeLa cells were transfected with fluo-pDNA/rho-HIS complexes. The fluorescence emission of fluo-pDNA (in green), rho-HIS (in red) was recorded under 488 nm and 524 nm excitations. Nucleus were labelled in blue with Draq5 (exc : 633 nm). NFRET ratio images were calculated according to Xia’s normalization. FRET level of 0 (dark blue) to 50 (white).

Liste des principales publications

Breuzard, G ; Tertil, M ; Goncalves, C ; Cheradame, H ; Géguan, P ; Pichon, C ; Midoux, P Nuclear delivery of NFΚB-assisted DNA/polymer complexes : plasmid DNA quantitation by confocal laser scanning microscopy and evidence of nuclear polyplexes by FRET imaging. Nucleic Acids Res. (2008) 36(12):e71.

Midoux, P ; Breuzard, G ; Gomez, J.P. ; Pichon, C Polymer-based gene delivery : A current review on the uptake and intracellular trafficking of polyplexes. Current Gene Therapy (2008) 8:335-52

Mockey, M ; Bourseau, E ; Chandrashekhar, V ; Chaudhuri, A ; Lafosse, S ; Le Cam, E ; Quesniaux, V ; Ryffel, B ; Pichon, C ; Midoux, P mRNA-based cancer vaccine : prevention of B16 melanoma progression and metastasis by systemic injection of MART1 mRNA histidylated lipopolyplexes. Cancer Gene Ther. (2007)14 802-814