Centre de biophysique moléculaire - UPR 4301

La biosynthèse des glycoconjugués est abordée sous trois aspects : enzymologie, contrôle d’expression et biotechnologie des glycosyltransférases.

DESCRIPTIF DU TRAVAIL DE RECHERCHE

1) O-glycosylation de type mucine chez les eucaryotes supérieurs

• Etude de la relation structure/fonction d’une enzyme de la famille des polypeptide alpha GalNAc transférases impliquées dans la 1ère étape de la O-glycosylation de type mucine : synthèse d’analogues de l’UDP-GalNAc permettant une investigation du site actif de ce type d’enzymes.
• MUC1 et cancer, synthèse chimioenzymatique d’antig’nes tumoraux analogues de MUC1 et étude du pouvoir immunogène de ces glycopeptides
• Glycosylation et cancer : synthèse de sucres modifiés capables d’ˆtre incorporés spécifiquement et en grande quantité dans les glycoprotéines de type mucines et dans les glycolipides à la surface des cellules cancéreuses.

2) O-glycosylation de type mucine chez la levure

Création d’une souche de levures capable de produire des glycopeptides portant des O-glycanes de type mucine de mammifères et qui serait un outil précieux pour l’expression de glycoprotéines hétérologues par ces microorganismes.

3) N- glycosylation et cancer

Etude du rôle des N-glycanes du récepteur CD16a (FcgammaRIIIa) présent sur les cellules NK et sur les macrophages et impliqué dans la cytotoxicité anticorps-dépendante (ADCC) : implication du polymorphisme de CD16a sur la structure de ses glycanes et sur la reconnaissance des anticorps thérapeutiques.

ILLUSTRATIONS

Légendes : Figure 1 :

Observation en microscopie confocale de cellules de levure transformées capables de réaliser la première étape de la glycosylation de type mucine : révélation, à l’aide d’une lectine (VVA) spécifique de GalNAc, de la présence de glycoprotéines de surface porteuses de GalNAc par immunofluorescence (panneaux de gauche) ; panneaux de droite : contraste de phase. Barre d’échelle : 2µm. Saccharomyces cerevisiae souche BJ5465 Dpmt1 -3T Figure 2 :

Nous utilisons des enzymes recombinantes pour synthétiser des substrats accepteurs. Quatre enzymes sont nécessaires pour permettre la régénération de l’UDP-GalNAc Liste des principales publications

• Bourgeaux, V ; Cadène, M ; Piller, F ; Piller, V Efficient enzymatic glycosylation of peptides and oligosaccharides from GalNAc and UTP ChemBioChem (2007) 8 37-40

• Cremer, GA ; Bureaud, N ; Piller, V ; Kunz, H ; Piller F ; Delmas, AF Synthesis and biological evaluation of a multiantigenic Tn/TF-containing glycopeptide mimic of the tumor-related MUC1 glycoprotein ChemMedChem (2006) 1 965-968

• Bourgeaux, V ; Piller, F ; Piller, V Two-step enzymatic synthesis of UDP-N-acetylgalactosamine Bioorg. Med. Chem. Lett. (2005) 15 5459-5462

• Dalziel, M ; Dall’Olio, F ; Mungul, A ; Piller, V ; Piller, F Ras oncogene induces beta-galactoside alpha2,6-sialyltransferase (ST6Gal I) via a RalGEF-mediated signal to its housekeeping promoter Eur. J. Biochem. (2004) 271 3623-3634

• Duclos, S ; Da Silva, P ; Vovelle, F ; Piller, F ; Piller, V Characterization of the UDP-N-acetylgalactosamine binding domain of bovine polypeptide alpha N-acetylgalactosaminyltransferase T1 Protein Eng. Des. Sel . (2004) 17 (8) 635-646

PILLER Véronique Chargée de recherche CNRS , Responsable de l’équipe  @

PILLER Friedrich Chargé de recherche INSERM  @

BOURGERIE Sylvain Maître de conférences en Biochimie,Université d’Orléans   @

BUREAUD Nicole Assistant-ingénieur CNRS  @

ROBERT Patrice Adjoint technique principal CNRS (50%)@

MICHEL Rémy Post-doctorant@

POUILLY Sabrina Doctorante@