Centre de biophysique moléculaire - UPR 4301

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PRINCIPE

 Analyse cellulaire

La cytométrie en flux permet l’analyse des caractéristiques physico-chimiques de cellules, dans des conditions non toxiques, de façon qualitative et quantitative, à haut débit. Les paramètres cellulaires extrinsèques peuvent être révélés par une sonde fluorescente interagissant spécifiquement avec la cellule ou certains de ses éléments (Fluorescence Activated Cell Sorter).

 Tri cellulaire

Le tri cellulaire permet de purifier des sous populations à partir d’une population hétérogène, d’éliminer des cellules mortes d’une culture et de faire du clonage en plaçant une cellule par puits dans une plaque de culture.

• → Basse ou haute pression ? Quel type de tri convient le mieux à votre étude ?
• → Exemple de tri cellulaire

EQUIPEMENT

La plate-forme de cytométrie en flux est constituée de trois appareils :

• - Deux analyseurs mis à disposition des personnes ayant suivi une formation spécifique
• - Un trieur de cellule nécessitant la présence d’un spécialiste

 Outils d’analyses cellulaires

Les deux cytomètres en flux analyseurs présentés ci-dessous sont utilisés lors d’ études incorporant un nombre varié de molécules fluorescentes, permettant ainsi de multiplier les paramètres expérimentaux. La cytométrie en flux permet l’étude statistique d’un échantillon cellulaire afin d’obtenir des résultats qualitatifs et quantitatifs.

• Le FACSort Le FACSort (Becton Dickinson) est équipé d’un laser Argon (raie principale d’émission de λex488nm). Son système permet la détection simultanée de 5 paramètres (taille, granulosité et fluorescences à 3 longueurs d’onde d’émission). Ce cytomètre en flux est associé au logiciel de pilotage et d’analyse CellQuest Pro.

• Le BD LSR Le BD LSR (Becton Dickinson) est équipé de trois lasers : Argon (λex488nm), Hélium-Néon (λex633nm) et Hélium-Cadmium (λex325nm) pour l’ultraviolet. Cet appareil permet la détection simultanée de 8 paramètres avec 6 fluorescences à des longueurs d’onde d’émission différentes. Il est associé au logiciel CellQuest Pro.

Outil de tris cellulaires

• Le FACSDiVa Le FACSDiVa (Becton Dickinson) posséde trois lasers (λex358nm, λex488nm et λex633nm) associés aux différentes options de tri. Il permet de trier jusqu’à 4 populations simultanément, d’effectuer des tris en plaques multi-puits et de cloner, le tout à haut débit. Le FACSDiVa est caractérisé par son acquisition digitalisée DiVa permettant un contrôle très précis des différents paramètres de tri.