La microscopie cofoncale

La microscopie confocale permet d’optimiser la résolution des images en microscopie de fluorescence et d’observer les éléments intracellulaires en trois dimensions. Elle réalise des coupes optiques virtuelles dans l’objet observé et enregistre les signaux optiques émis dans chaque plan.

Principe :

La microscopie confocale à balayage laser permet d’optimiser la résolution des images en microscopie de fluorescence. Ce système permet de réaliser des coupes optiques extrêmement fines (inférieure à 0,125µm d’épaisseur) à l’aide d’un diaphragme (pinhole), et ainsi de procéder à une véritable dissection optique de l’échantillon sans aucune altération ni préparation préalable, contrairement à d’autres méthodes comme la microscopie électronique. Ce système offre l’avantage de pouvoir observer la dynamique (spatiale et temporelle) de molécules marquées ou fluorophores intrinsèques directement chez la cellule vivante.

Équipements :

Microscope Confocal Airyscan LSM 980 Airyscan 2 Multiplex 4Y

Microscope inversé motorisé AxioObserver 7
Incubation en temperature, Chambre XL noire / Incubation CO2

4 objectifs Plan Apochromat 10x/0,45 20x/0,8 40x/1.3 (Normarski) 63x/1.4
Tête confocale LSM 980 composé de
-6 lasers Diode : 405, 445, 488, 514, 561 et 639 nm
- 67 détecteurs décomposés en-32 GaAsP spectraux (USP) META
-2 PMTs latéraux
-1 T-PMT (transmission)
-32 GaAsP Airyscan (BREVET ZEISS)

Acquisitions possibles (non exhaustive) up to 8C, Z, t, Tile and position
-On Line Finger Printing (BREVET ZEISS)

Super resolution - SR confocale (BREVET ZEISS) / Multiplex 4Y en mode SR (BREVET ZEISS) 

 

Le Meta est un spectromètre qui diffuse une émission de fluorescence parmi un ensemble de détecteurs. C'est en soi un filtre d'émission configurable

La possibilité d’aborder des problématiques concernant des interactions moléculaires (ligand-récepteur par exemple) par des méthodes fluorescence adaptées à l’imagerie (FRET, FRAP), fait de ce système un outil performant pour une analyse intracellulaire à l’échelle moléculaire.

 

Voir aussi dans «P@CYFIC – Plateforme Cytométrie en flux et imagerie cellulaire»

La cytométrie en flux La cytométrie en flux permet l’analyse qualitative et quantitative de cellules, de bactéries, d’organites ou de particules dans des conditions non toxiques à haut débit. Cette technique permet le phénotypage de cellules au sein d’une population hétérogènes par immunofluorescence. Divers paramètres tels que la taille, la granulosité et tous composants ou fonctions susceptibles d’être révélés par une sonde fluorescente peuvent être analysés. La cytométrie en flux permet également de trier les cellules en fonction de leurs caractéristiques physiques ou biologiques observés lors de l’analyse. La vidéo microscopie de fluorescence Cet outil permet de visualiser différents phénomènes cellulaires dynamiques (internalisation, transmigration, roulement, adhésion, angiogénèse…) et d’effectuer des mesures d’interaction cellules cellules ou cellules particules dans des conditions de flux proche de la circulation sanguine.