Cofoncal microscopy

Confocal microscopy allows to optimize the resolution of the images in fluorescence microscopy and to observe the intracellular elements in three dimensions. It realizes virtual optical slices in the observed object and records the optical signals emitted in each plane.

Principe :

La microscopie confocale à balayage laser permet d’optimiser la résolution des images en microscopie de fluorescence. Ce système permet de réaliser des coupes optiques extrêmement fines (inférieure à 0,8µm d’épaisseur) à l’aide d’un diaphragme (pinhole), et ainsi de procéder à une véritable dissection optique de l’échantillon sans aucune altération ni préparation préalable, contrairement à d’autres méthodes comme la microscopie électronique. Ce système offre l’avantage de pouvoir observer la dynamique (spatiale et temporelle) de molécules marquées ou fluorophores intrinsèques directement chez la cellule vivante.

Équipements :

La plateforme d’imagerie confocale est équipée d’un système LSM 510 Meta (ZEISS), doté d’un laser Argon (λex 458nm, 477nm, 488nm et 514nm) et de 2 lasers Hélium-Néon (λex 543nm et 633nm), offrent une large gamme de raies excitatrices pour un grand nombre de molécules fluorescentes.

 

 

Il est associé à un microscope AXIOVERT 200 avec une source lumière propre (lampe à mercure à arc court FLUOARC).

Enfin, le statif inversé est équipé d’un objectif 10x et de trois objectifs à immersion 40x, 63x et 100x.


Par ailleurs, le mode Meta du système permet la simulation d’une analyse spectrale de l’image grâce à des filtres bande passante qui permettent de sélectionner une largeur de bande inférieure à 10nm.

La possibilité d’aborder des problématiques concernant des interactions moléculaires (ligand-récepteur par exemple) par des méthodes fluorescence adaptées à l’imagerie (FRET, FRAP), fait de ce système un outil performant pour une analyse intracellulaire à l’échelle moléculaire.

 

Voir aussi dans «P@CYFIC (cellular imaging and flow cytometry)»

Flow cytometry Flow cytometry allows the qualitative and quantitative analysis of cells, bacteria, organelles or particles under non-toxic high throughput conditions. This technique allows the phenotyping of cells within a heterogeneous population by immunofluorescence. Various parameters such as size, granulosity and any components or functions that can be revealed by a fluorescent probe can be analyzed. Flow cytometry also allows cell sorting according to cell physical or biological characteristics observed during the analysis. The fluoresence microscopy video This tool allows to visualize different dynamic cellular phenomena (internalization, transmigration, rolling, adhesion, angiogenesis ...) and to carry out cell-cell or cell-particle interaction measurements under flow conditions close to the blood circulation.