Lorsqu’un échantillon cellulaire présente une distribution homogène d’une population moléculaire fluorescente, sa capacité à émettre de la fluorescence peut être inhibée de manière irréversible dans une zone restreinte à l’aide d’un flash lumineux de forte intensité obtenu en exposant brièvement cette zone avec le laser.
Deux populations de molécules sont ainsi créées (une fluorescente, l’autre pas) radicalement distinctes. Une redistribution des 2 populations entre la zone bleachée et le milieu adjacent peut être observée jusqu’à l’homogénéisation des populations.
Deux paramètres sont alors dérivés d’une expérience de FRAP : la fraction mobile qui correspond à la quantité de fluorescence effectivement récupérée après photoblanchiment, et le temps de diffusion.
La valeur de la fraction mobile peut être influencée par les interactions d’une protéine fluorescente avec d’autres molécules ou la membrane.
De même, le temps de diffusion est proportionnel à la constante de diffusion dépendant elle-même des propriétés hydrodynamiques de la molécule observée dans son environnement.
La technique de FRAP est donc particulièrement adaptée, entre autres, à l’étude du trafic de protéines intracellulaire fluorescentes.
