Circular Dichroism

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Circular dichroism is an excellent method for analyzing protein and nucleic acid secondary structure in solution. It can also be used to follow the changes in folding as a function of temperature (or pH, buffer …), or for measuring protein-ligand and nucleic acid-ligand interactions.
The Jasco J-810 spectropolarimeter is research-grade system, spectral measurement can be recorded down to 180 nm.

Dans les cas des protéines, la mesure du dichroïsme circulaire dans l’UV lointain (180-260 nm, zone d’absorption de la liaison peptidique) contient des informations sur leur structure secondaire (hélices α, feuillets β, tours et structures désordonnées). Le traitement des données par des logiciels appropriés permet une estimation de la quantité respective des différentes conformations.
Les signaux dichroïques dans l’UV proche (250-330 nm, zone d’absorption des acides aminés aromatiques) fournissent des informations sur l’environnement de ces acides aminés aromatiques.

Cette technique permet l’étude de l’effet de l’environnement sur la structure d’une molécule (pH, dénaturation par les détergents, température, effet de ligand, interactions moléculaires..). Des études cinétiques peuvent être effectuées grâce à un accessoire de mélange rapide (“stopped-flow").

 

 

Le dichroïsme circulaire est une technique spectroscopique d’analyse couramment utilisée pour étudier la conformation des protéines et des acides nucléiques, mais aussi pour les polysaccharides ou pour les petites molécules. Elle est particulièrement adaptée à l’étude des changements structuraux induits par des variations du milieu (pH, température, détergents, co-solvants, tampons …). Parmi les avantages du dichroïsme circulaire vis-à-vis d’autres techniques, on peut citer que l’on travaille en solution diluée, avec de faibles quantités de produit (quelques dizaines de µg), sans limite de taille sur la molécule. Les mesures sont simples et rapides, permettant des mesures cinétiques à des temps très courts. De plus la mesure n’est pas destructrice et il est possible de récupérer l’échantillon après l’acquisition du spectre.

 

 

Voir aussi dans «Optical spectroscopy facility»

UV-visible absorption spectrophotometry